{"id":15020,"date":"2021-03-23T16:53:13","date_gmt":"2021-03-23T15:53:13","guid":{"rendered":"https:\/\/gezonde-darmflora.nl\/spiegazione-dei-test-pcr-da-parte-del-nostro-tecnico-di-laboratorio-principale\/"},"modified":"2025-01-27T16:17:21","modified_gmt":"2025-01-27T15:17:21","slug":"spiegazione-dei-test-pcr-da-parte-del-nostro-tecnico-di-laboratorio-principale","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/gezonde-darmflora.nl\/it\/spiegazione-dei-test-pcr-da-parte-del-nostro-tecnico-di-laboratorio-principale\/","title":{"rendered":"Spiegazione dei test PCR da parte del nostro tecnico di laboratorio principale"},"content":{"rendered":"<div class=\"wpb-content-wrapper\"><p>[vc_row full_width=&#8221;stretch_row_content_no_spaces&#8221;][vc_column]\r\n    <div class=\"page-title\">\r\n        <div class=\"container\">\r\n            <div class=\"row\">\r\n                <div class=\"col\">\r\n                    <h1>Spiegazione dei test PCR da parte del nostro tecnico di laboratorio principale<\/h1>\r\n                <\/div>\r\n            <\/div>\r\n        <\/div>\r\n    <\/div>\r\n\r\n    [\/vc_column][\/vc_row][vc_row equal_height=&#8221;yes&#8221;][vc_column width=&#8221;3\/4&#8243;][vc_column_text]<\/p>\n<blockquote><p><b>La reazione a catena della polimerasi: la tecnica della PCR spiegata<\/b><\/p>\n<p><em>Una tecnica comunemente utilizzata nei laboratori degli ospedali, delle universit\u00e0 di medicina o delle fabbriche in cui vengono trattati ed esaminati alimenti o acqua, ad esempio, \u00e8 la PCR. Questo metodo di ricerca relativamente giovane &#8211; sviluppato all&#8217;inizio degli anni &#8217;80 &#8211; \u00e8 stato rivoluzionario per il rilevamento e l&#8217;individuazione di organismi come batteri e virus. Per il rilevamento e l&#8217;esame del materiale genetico nelle indagini forensi, la tecnica della PCR \u00e8 anche fondamentale per trovare un colpevole.  <\/em><\/p>\n<p><em>Dopo la pandemia della corona del 2019, nei telegiornali e nei relativi programmi informativi si \u00e8 parlato molto del test PCR per la SARS-COV-2: il tipo di coronavirus responsabile della malattia COVID. Ma cos&#8217;\u00e8 esattamente la PCR e come funziona? <\/em> <em>L&#8217;abbreviazione PCR sta per Polymerase Chain Reaction (reazione a catena della polimerasi). La polimerasi \u00e8 un enzima, la catena \u00e8 la parola inglese per &#8220;chain&#8221; e la parola reazione si traduce facilmente in &#8220;reaction&#8221;. <\/em><br \/>\n<em>Si tratta quindi di una reazione a catena guidata da un particolare enzima, la polimerasi.  <\/em><em>Per spiegare quale reazione a catena \u00e8 coinvolta, dobbiamo tornare alle basi e cio\u00e8 al vettore di tutto il materiale ereditario: il DNA. Ogni cellula di un organismo vivente contiene il DNA (o un suo derivato) ed \u00e8 composto da circa quattro diversi blocchi di costruzione: adenina (A), timina (T), guanina (G) e citosio (C). Questi blocchi possono essere collegati tra loro in un numero infinito di combinazioni e queste combinazioni forniscono le propriet\u00e0 ereditarie.    <\/em><em>Su un tale filamento di DNA &#8211; che \u00e8 composto da questi elementi costitutivi &#8211; molte informazioni ereditarie corrispondono a un conspecifico. Tuttavia, ci sono sempre dei pezzetti (chiamati geni) sul filamento di DNA che sono molto specifici. Ad esempio, un batterio pu\u00f2 sopravvivere in un ambiente acido mentre un altro no. Il batterio amante dell&#8217;acido produrr\u00e0 sostanze che lo faranno sentire bene e l&#8217;acido non attaccher\u00e0 la parete cellulare, mentre un altro batterio &#8211; che \u00e8 un parente &#8211; non pu\u00f2 e non sopravviver\u00e0 in un ambiente acido.   <\/em><\/p>\n<p><em>La tecnica della PCR utilizza il rilevamento di quei pezzi di DNA che sono molto specifici. \u00c8 come cercare un ago in un pagliaio con diversi tipi di spilli, con i quali si pu\u00f2 comunque estrarre quell&#8217;unico spillo speciale con un magnete molto forte. Il problema del DNA \u00e8 che non \u00e8 possibile vedere un solo pezzo di filamento ed \u00e8 per questo che \u00e8 stata sviluppata la reazione a catena. Milioni di copie vengono fatte di quell&#8217;unico pezzo di DNA specifico e, grazie a un trucco incorporato, le molecole fluorescenti si accendono o si spengono. Il grado di fluorescenza pu\u00f2 essere misurato con determinate apparecchiature.    <\/em><\/p>\n<p><b>Il principio della reazione a catena della polimerasi<\/b><\/p>\n<p><em>Lo scopo della reazione PCR \u00e8 quello di moltiplicare lo specifico pezzo di materiale ereditario e rendere il risultato misurabile con la fluorescenza.<\/em><br \/>\n<em>Ci\u00f2 richiede una serie di componenti messi insieme in un recipiente di reazione:<\/em><\/p>\n<ul>\n<li><em>DNA isolato: DNA rilasciato da cellule presenti, ad esempio, nell&#8217;acqua, nel sangue o nel latte.<\/em><\/li>\n<li><em>I mattoni: adenina, timina, guanina e citosi<\/em><\/li>\n<li><em>Primer: frammenti di DNA che si attaccano all&#8217;inizio e alla fine del pezzo di materiale ereditario da copiare. A questi primer sono attaccate delle bandierine fluorescenti che sono &#8220;spente&#8221; quando non succede nulla nella reazione. <\/em><\/li>\n<li><em>Enzima: l&#8217;enzima polimerasi in grado di collegare i blocchi di costruzione A, T, C e G ai primer nell&#8217;ordine corretto.<\/em><\/li>\n<li><em>Tampone: si tratta di un liquido in cui sono disciolti tutti i componenti e che fornisce un ambiente ottimale per lo svolgimento della reazione.<\/em><\/li>\n<\/ul>\n<p><em>Il processo di copiatura consiste in un ciclo di passaggi ripetuti pi\u00f9 volte.<span class=\"Apple-converted-space\">  <\/span>In genere, sono sufficienti 40-45 ripetizioni del ciclo per produrre miliardi di copie. Fai i conti: se ipotizzi un pezzo di DNA, dopo il primo ciclo hai due copie, dopo il terzo ciclo quattro, poi otto, 16 e cos\u00ec via. Il recipiente di reazione con tutti i componenti \u00e8 collocato in un dispositivo che pu\u00f2 riscaldarsi e raffreddarsi in modo molto preciso e veloce. Un ciclo consiste (generalmente) in:   <\/em><\/p>\n<ul>\n<li><em>Denaturazione del DNA: il DNA \u00e8 composto dai blocchi A, T, C e G che formano un doppio filamento di DNA. Questi composti devono essere separati e questo pu\u00f2 essere fatto aumentando la temperatura a 90-96\u00b0C. <\/em><\/li>\n<li><em>Una volta separati i filamenti, i primer possono iniziare ad attaccarsi all&#8217;inizio e alla fine del pezzo di DNA da dimostrare. Per fare ci\u00f2, la temperatura viene ridotta a 45-65\u00b0C. <\/em><\/li>\n<li><em>Ora tocca all&#8217;enzima polimerasi collegare i blocchi di costruzione A, T, C e G dei primer collegati a una temperatura di 72\u00b0C. La copia \u00e8 fatta! <\/em><\/li>\n<\/ul>\n<p><em>Dopo ogni ciclo, il dispositivo registra la quantit\u00e0 di fluorescenza misurata. Se i primer non riescono a trovare il pezzo di DNA specifico, non succede nulla durante tutti questi cicli. La molecola fluorescente attaccata al primer rimane &#8220;spenta&#8221;. Quando invece avviene una reazione, l&#8217;enzima polimerasi fa s\u00ec che la molecola si scolleghi durante la copiatura. La molecola inizia quindi a emettere luce, che pu\u00f2 essere misurata a una certa lunghezza d&#8217;onda dal dispositivo PCR.      <\/em><em>La regola per l&#8217;analisi \u00e8: pi\u00f9 fluorescenza viene misurata, pi\u00f9 molecole erano presenti all&#8217;inizio della procedura di copiatura. In una determinazione qualitativa &#8211; il DNA da esaminare \u00e8 presente s\u00ec o no &#8211; l&#8217;analista legge il valore Ct (soglia). Questo valore rappresenta il ciclo in cui il dispositivo inizia a rilevare la fluorescenza. Quindi un valore Ct basso significa che nel campione isolato era presente molto materiale specifico, ma non si pu\u00f2 dire nulla sulle quantit\u00e0 esatte.     <\/em><em>Ci saranno anche situazioni in cui \u00e8 importante sapere non solo se un determinato pezzo di DNA \u00e8 presente nel campione, ma anche quanto. In questo caso si parla di PCR quantitativa, nota anche come qPCR. Per questo, oltre al campione da analizzare, \u00e8 necessario utilizzare una serie in cui le concentrazioni siano note e determinare una curva di calibrazione. Utilizzando questa linea di calibrazione, \u00e8 possibile calcolare quale fosse la concentrazione iniziale nel recipiente di reazione contenente il DNA isolato.   <\/em><\/p>\n<p><em>Uno dei principali vantaggi della tecnica PCR \u00e8 che teoricamente ha bisogno di un solo pezzo di DNA specifico per avviare la reazione ed \u00e8 quindi molto sensibile. In questo modo \u00e8 possibile rilevare un solo batterio della legionella in dieci litri d&#8217;acqua che potrebbe potenzialmente causare malattie. Oppure si pu\u00f2 individuare l&#8217;agente causale della tubercolosi, molto difficile da coltivare, nel muco tossito dal paziente. In alcuni casi, per\u00f2, lo svantaggio \u00e8 che non si pu\u00f2 dimostrare se l&#8217;organismo in questione \u00e8 ancora vivo o se si sta analizzando un frammento di DNA di un virus o di un batterio che in realt\u00e0 non pu\u00f2 pi\u00f9 causare malattie perch\u00e9 \u00e8 morto. In genere non viene fatta alcuna distinzione nella reazione. Questa discussione \u00e8 stata spesso sollevata dai media quando \u00e8 stato rilevato il coronavirus e ha causato molta confusione e critiche sull&#8217;uso di questa tecnica per rilevare il virus in un tampone nasale e\/o della gola. Se il valore di Ct \u00e8 elevato e il materiale iniziale del coronavirus &#8211; in questo caso &#8211; \u00e8 scarso, c&#8217;\u00e8 ancora infettivit\u00e0? E potrebbe anche accadere che con la PCR si perdano particelle di virus o che il risultato sia positivo anche se non \u00e8 presente alcun virus?       <\/em><\/p>\n<p><em>Le probabilit\u00e0 di ottenere un risultato falso positivo da un test PCR sono piuttosto basse. Le probabilit\u00e0 di ottenere un test falso negativo, invece, sono pi\u00f9 alte. Questo perch\u00e9 \u00e8 molto pi\u00f9 probabile che vengano commessi errori durante la raccolta del campione, il trasporto o le operazioni in laboratorio. Quindi non \u00e8 il test PCR a dare necessariamente risultati falsi negativi, ma tutte le azioni che lo circondano. Se si ha accesso a un test PCR e alle attrezzature per rilevare i processori della malattia, la maggior parte dei laboratori opter\u00e0 per questa tecnica.    <\/em><\/p>\n<p><em>Marije, responsabile del laboratorio.<\/em><\/p>\n<p>&nbsp;<\/p><\/blockquote>\n<p>[\/vc_column_text]<div class=\"eye_empty_space pt-md-3 pb-md-3   pt-2 pb-2\"><\/div>[\/vc_column][vc_column width=&#8221;1\/4&#8243; el_class=&#8221;d-flex align-items-center&#8221;][\/vc_column][\/vc_row][vc_row equal_height=&#8221;yes&#8221;][vc_column width=&#8221;3\/4&#8243;]<div class=\"eye_empty_space pt-md-4 pb-md-4   pt-3 pb-3\"><\/div>[\/vc_column][vc_column width=&#8221;1\/4&#8243; el_class=&#8221;d-flex align-items-center&#8221;][\/vc_column][\/vc_row][vc_row equal_height=&#8221;yes&#8221;][vc_column width=&#8221;3\/4&#8243;][\/vc_column][vc_column width=&#8221;1\/4&#8243; el_class=&#8221;d-flex align-items-center&#8221;][\/vc_column][\/vc_row][vc_row][vc_column]<div class=\"eye_empty_space pt-md-4 pb-md-4   pt-3 pb-3\"><\/div>\r\n    <div class=\"home-reviews\">\r\n        <div class=\"row d-flex\">\r\n                                                <div class=\"col-lg-4 d-flex\">\r\n                        <div class=\"review-card\">\r\n                            <h6>N<\/h6>\r\n                            <span style=\"font-size: 1rem\">DF7\" \"DF6<\/span>\r\n                            <div class=\"review-card__stars\">\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                            <\/div>\r\n\r\n                            <p>Avevo molta paura di sottopormi a questa procedura, ma sono davvero felice di averlo fatto. Avevo distrutto la mia flora intestinale con gli antibiotici nel tentativo di risolvere la mia intolleranza all&#8217;istamina. Ero praticamente costretto sul divano e soffrivo costantemente a causa dei problemi intestinali. Avevo anche dei problemi mentali molto gravi dopo aver assunto\u2026 <a href=\"https:\/\/gezonde-darmflora.nl\/it\/review\/n\/\">Leggi tutto &raquo;<\/a><\/p>\r\n                        <\/div>\r\n                    <\/div>\r\n                                    <div class=\"col-lg-4 d-flex\">\r\n                        <div class=\"review-card\">\r\n                            <h6>Anonimo (USA)<\/h6>\r\n                            <span style=\"font-size: 1rem\">DF7 DF6<\/span>\r\n                            <div class=\"review-card__stars\">\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                            <\/div>\r\n\r\n                            <p>Questo prodotto ha letteralmente cambiato la mia vita. Oltre a problemi di stomaco e intestinali, ho sofferto per anni di stanchezza debilitante, dolore cronico, nebbia cerebrale e gravi allergie. Mi sentivo costantemente male, riuscivo a malapena a funzionare e potevo fare solo il minimo indispensabile per sopravvivere, e a volte nemmeno quello. Sono stati anni\u2026 <a href=\"https:\/\/gezonde-darmflora.nl\/it\/review\/anonimo-usa\/\">Leggi tutto &raquo;<\/a><\/p>\r\n                        <\/div>\r\n                    <\/div>\r\n                                    <div class=\"col-lg-4 d-flex\">\r\n                        <div class=\"review-card\">\r\n                            <h6>Javier (Spagna)<\/h6>\r\n                            <span style=\"font-size: 1rem\">DF6<\/span>\r\n                            <div class=\"review-card__stars\">\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                                <i class=\"fas fa-star\"><\/i>\r\n                            <\/div>\r\n\r\n                            <p>A distanza di circa un anno dal primo FMT (DF6) posso affermare che \u00e8 stato uno strumento molto utile. Avevo una disbiosi dominata da P. Copri, ma con l&#8217;aggiustamento della dieta, gli integratori e la FMT ho potuto riequilibrare e stabilizzare la flora. Il P copri \u00e8 ora molto meno abbondante e il genere Bacteroides\u2026 <a href=\"https:\/\/gezonde-darmflora.nl\/it\/review\/javier-spagna\/\">Leggi tutto &raquo;<\/a><\/p>\r\n                        <\/div>\r\n                    <\/div>\r\n                                    <\/div>\r\n\r\n    <\/div>\r\n\r\n    [\/vc_column][\/vc_row]<\/p>\n<\/div>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>[vc_row full_width=&#8221;stretch_row_content_no_spaces&#8221;][vc_column][\/vc_column][\/vc_row][vc_row equal_height=&#8221;yes&#8221;][vc_column width=&#8221;3\/4&#8243;][vc_column_text] La reazione a catena della polimerasi: la tecnica della PCR spiegata Una tecnica comunemente utilizzata nei laboratori degli ospedali, delle universit\u00e0 di medicina o delle fabbriche in cui vengono trattati ed esaminati alimenti o acqua, ad esempio, \u00e8 la PCR. 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